Bahan tanduran lan patogen
Populasi pemetaan asosiasi sorghum dikenal minangka populasi konversi sorghum (SCP) diwenehake dening Dr. Pat Brown ing Universitas Illinois (saiki ing UC Davis).Wis diterangake sadurunge lan minangka koleksi garis warna-warni sing diowahi dadi photoperiod-insensitivity lan stature sing luwih cilik kanggo nggampangake wutah lan pangembangan tanduran ing lingkungan AS.510 garis saka populasi iki digunakake ing panliten iki sanajan amarga germination sing ora becik lan masalah kontrol kualitas liyane, ora kabeh garis digunakake ing analisis kabeh telung sipat.Pungkasane data saka 345 garis digunakake kanggo analisis respon kitin, 472 garis kanggo respon flg22, lan 456 kanggo resistensi TLS.B. masakgalur LSLP18 dijupuk saka Dr.. Burt Bluhm ing Universitas Arkansas.
Pengukuran respon MAMP
Rong MAMP sing beda digunakake ing panliten iki flg22, (Katalog Genscript# RP19986), lan kitin.Tanduran sorgum ditanam ing sisipan sing dilebokake ing flat sing diisi lemah (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) ing omah kaca.Tetanduran disiram sedina sadurunge koleksi sampel kanggo ngindhari kelembapan godhong tambahan ing dina koleksi.
Garis-garis kasebut diacak lan, amarga alasan logistik, ditanam ing batch 60 baris.Kanggo saben baris, telung 'pot' ditandur kanthi rong wiji saben baris.Batch sakteruse ditandur sawise batch sadurunge wis diproses nganti kabeh populasi wis ditaksir.Loro eksperimen eksperimen ditindakake kanggo loro MAMP kanthi genotipe sing diacak maneh ing saben loro.
Tes ROS ditindakake kaya sing diterangake sadurunge.Sedhela, saben baris, enem wiji ditandur ing 3 pot sing beda.Saka tunas sing diasilake, telung dipilih adhedhasar keseragaman.Bibit sing katon ora biasa utawa luwih dhuwur utawa luwih cendhek tinimbang mayoritas ora digunakake.Papat cakram rwaning diameter 3 mm dipotong saka sisih paling amba saka godhong kaping 4 saka telung tanduran sorgum umur 15 dina sing beda.Siji cakram saben godhong saka rong tanduran lan rong cakram saka siji tanduran, kanthi cakram kapindho dadi kontrol banyu (ndeleng ngisor).Cakram kasebut diapungake kanthi individu ing 50 µl H20 ing piring sumur ireng 96, disegel nganggo segel aluminium supaya ora kena cahya, lan disimpen ing suhu kamar sewengi.Esuke solusi reaksi digawe nggunakake probe chemiluminescent 2 mg / ml L-012 (Wako, katalog # 120-04891), 2 mg / ml horseradish peroksidase (Tipe VI-A, Sigma-Aldrich, katalog # P6782), lan 100 mg/ml Kitin utawa 2 μM Flg22.50 µl larutan reaksi iki ditambahake ing telu saka papat sumur.Sumur kaping papat yaiku kontrol mock, sing ditambahake solusi reaksi ora kalebu MAMP.Sekawan sumur kosong sing isine mung banyu uga kalebu ing saben piring.
Sawise nambahake solusi reaksi, luminescence diukur nggunakake SynergyTM 2 multi-deteksi microplate reader (BioTek) saben 2 menit kanggo 1 jam.Pembaca piring njupuk pangukuran luminescence saben 2 menit sajrone 1 jam iki.Jumlah kabeh 31 wacan diwilang kanggo menehi nilai kanggo saben sumur.Nilai kira-kira kanggo respon MAMP kanggo saben genotipe diwilang minangka (nilai luminescence rata-rata saka telung sumur eksperimen-nilai sumur mock) -minus nilai sumur kosong rata-rata.Nilai sumur kosong terus-terusan cedhak karo nol.
Cakram godhong sakaNicotiana benthamiana, siji baris sorghum responsif dhuwur (SC0003), lan siji baris sorghum responsif kurang (PI 6069) uga kalebu minangka kontrol ing saben piring 96-sumur kanggo tujuan kontrol kualitas.
B. masakpersiapan inokulum lan inokulasi
B. masakinokulum wis disiapake kaya sing diterangake sadurunge.Sedhela, wiji sorghum direndhem ing banyu suwene telung dina, dibilas, dicelupake ing labu kerucut 1L lan diautoklaf sajrone jam kanthi suhu 15psi lan 121 °C.Biji-bijian kasebut banjur diinokulasi karo sekitar 5 ml miselia maserasi saka kultur segerB. masakLSLP18 diisolasi lan ditinggal 2 minggu ing suhu kamar, goyangake labu saben 3 dina.Sawise 2 minggu, wiji sorghum sing kena jamur dikeringake kanthi hawa lan disimpen ing suhu 4 ° C nganti inokulasi ing lapangan.Inokulum sing padha digunakake kanggo kabeh uji coba lan digawe seger saben taun.Kanggo inokulasi, 6-10 biji sing kena infeksi dilebokake menyang whorl tanduran sorghum umur 4-5 minggu.Spora sing diasilake saka jamur kasebut nyebabake infeksi ing tanduran sorghum enom sajrone seminggu.
Persiapan wiji
Sadurunge ditandur ing lapangan wiji sorgum diobati karo fungisida, insektisida, lan campuran aman sing ngemot ~ 1% Spirato 480 FS fungisida, 4% Sebring 480 FS fungisida, 3% Sorpro 940 ES wiji safener.Banjur wiji kasebut dikeringake kanthi hawa suwene 3 dina sing menehi lapisan tipis campuran iki ing sekitar wiji.Safener ngidini panggunaan herbisida Dual Magnum minangka perawatan pra-emergence.
Evaluasi Resistensi Titik Daun Sasaran
SCP ditanam ing Stasiun Riset Tanaman Tengah ing Clayton, NC tanggal 14-15 Juni 2017 lan 20 Juni 2018 kanthi desain blok lengkap kanthi acak kanthi rong ulangan eksperimen ing saben kasus.Uji coba ditandur ing baris tunggal 1,8 m kanthi jembar baris 0,9 m kanthi nggunakake 10 wiji saben plot.Loro larik tapel wates ditanam ing pinggir saben eksperimen kanggo nyegah efek pinggir.Eksperimen kasebut disuntik ing tanggal 20 Juli 2017 lan 20 Juli 2018 nalika tanduran sorghum ana ing tahap pertumbuhan 3. Rating dijupuk ing skala siji nganti sangang, ing endi tanduran sing ora ana tandha-tandha penyakit dicetak minangka sangang lan rampung. tanduran mati padha ngetung minangka siji.Loro rating dijupuk ing 2017 lan papat maca ing 2018 wiwit rong minggu sawise inokulasi saben taun.sAUDPC (wilayah standar ing kurva kemajuan penyakit) diwilang kaya sing diterangake sadurunge.
Wektu kirim: Apr-01-2021