Bahan tanduran lan patogen
Populasi pemetaan asosiasi sorgum sing dikenal minangka populasi konversi sorgum (SCP) diwenehake dening Dr. Pat Brown ing Universitas Illinois (saiki ing UC Davis). Iki wis diterangake sadurunge lan minangka koleksi galur maneka warna sing diowahi dadi ora sensitif marang fotoperiode lan ukuran sing luwih cilik kanggo nggampangake pertumbuhan lan perkembangan tanduran ing lingkungan AS. 510 galur saka populasi iki digunakake ing panliten iki sanajan amarga perkecambahan sing ala lan masalah kontrol kualitas liyane, ora kabeh galur digunakake ing analisis kabeh telung sipat kasebut. Pungkasane data saka 345 galur digunakake kanggo analisis respon kitin, 472 galur kanggo respon flg22, lan 456 kanggo resistensi TLS.B. cookeiGalur LSLP18 dipikolehi saka Dr. Burt Bluhm ing Universitas Arkansas.
Pangukuran respon MAMP
Rong MAMP sing beda digunakake ing panliten iki flg22, (katalog Genscript # RP19986), lan kitin. Tanduran sorgum ditandur ing sisipan sing dilebokake ing papan sing rata lan diisi lemah (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) ing omah kaca. Tanduran disiram sedina sadurunge pangumpulan sampel kanggo nyegah kelembapan godhong sing berlebihan ing dina pangumpulan.
Galur-galur kasebut di acak lan, amarga alasan logistik, ditandur ing kelompok 60 galur. Kanggo saben galur, telung 'pot' ditandur nganggo rong wiji saben galur. Batch sabanjure ditandur sanalika batch sadurunge diproses nganti kabeh populasi ditaksir. Rong uji coba ditindakake kanggo loro MAMP kanthi genotipe sing diacak maneh ing saben rong uji coba.
Uji ROS ditindakake kaya sing wis diterangake sadurunge. Secara ringkes, kanggo saben galur, enem wiji ditandur ing 3 pot sing beda. Saka tunas sing diasilake, telu dipilih adhedhasar keseragaman. Tunas sing katon ora biasa utawa luwih dhuwur utawa luwih cendhek tinimbang umume ora digunakake. Papat cakram godhong kanthi diameter 3 mm dipotong saka bagean paling amba saka godhong kaping 4 saka telung tanduran sorgum umur 15 dina sing beda. Siji cakram saben godhong saka rong tanduran lan rong cakram saka siji tanduran, kanthi cakram kapindho dadi kontrol banyu (deleng ing ngisor iki). Cakram kasebut diapungake kanthi individu ing 50 µl H20 ing piring ireng 96-sumur, ditutup nganggo segel aluminium kanggo nyegah kena cahya, lan disimpen ing suhu kamar sewengi. Esuke, larutan reaksi digawe nggunakake probe chemiluminescent 2 mg/ml L-012 (Wako, katalog # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Tipe VI-A, Sigma-Aldrich, katalog # P6782), lan 100 mg/ml Chitin utawa 2 μM Flg22. 50 µl larutan reaksi iki ditambahake menyang telu saka papat sumur. Sumur kaping papat minangka kontrol tiruan, sing ditambahake larutan reaksi sing ora kalebu MAMP. Papat sumur kosong sing mung ngemot banyu uga dilebokake ing saben piring.
Sawisé nambahake larutan reaksi, luminesensi diukur nggunakaké SynergyTM 2 multi-detection microplate reader (BioTek) saben 2 menit suwéné 1 jam. Plate reader njupuk pangukuran luminesensi saben 2 menit suwéné 1 jam iki. Gunggung saka kabèh 31 bacaan diitung kanggo mènèhi nilai kanggo saben sumur. Nilai prakiraan kanggo respon MAMP kanggo saben genotipe diitung minangka (nilai luminesensi rata-rata saka telung sumur eksperimen—nilai sumur tiruan) -dikurangi nilai sumur kosong rata-rata. Nilai sumur kosong konsisten cedhak karo nol.
Cakram godhong sakaNicotiana benthamiana, siji galur sorgum responsif dhuwur (SC0003), lan siji galur sorgum responsif endhek (PI 6069) uga dilebokake minangka kontrol ing saben piring 96-sumur kanggo tujuan kontrol kualitas.
B. cookeipersiapan lan inokulasi inokulum
B. cookeiInokulum disiapake kaya sing wis diterangake sadurunge. Secara ringkes, biji sorgum direndhem ing banyu sajrone telung dina, dibilas, disendok menyang labu kerucut 1L lan diautoklaf sajrone sejam ing 15psi lan 121 °C. Biji-bijian kasebut banjur diinokulasi karo udakara 5 ml miselia sing wis dimaserasi saka kultur segerB. cookeiIsolat LSLP18 diisolasi lan ditinggalake sajrone 2 minggu ing suhu ruangan, diocok botol saben 3 dina. Sawise 2 minggu, butiran sorgum sing kena jamur dikeringake ing udara banjur disimpen ing suhu 4 °C nganti inokulasi lapangan. Inokulum sing padha digunakake kanggo kabeh uji coba lan digawe seger saben taun. Kanggo inokulasi, 6-10 butiran sing kena infeksi dilebokake ing tanduran sorgum umur 4-5 minggu. Spora sing diasilake saka jamur iki miwiti infeksi ing tanduran sorgum enom sajrone seminggu.
Persiapan wiji
Sadurunge ditandur ing lapangan, wiji sorgum diobati nganggo fungisida, insektisida, lan campuran safener sing ngandhut ~ 1% fungisida Spirato 480 FS, 4% fungisida Sebring 480 FS, 3% safener wiji Sorpro 940 ES. Banjur wiji kasebut dikeringake ing udhara sajrone 3 dina sing menehi lapisan tipis campuran iki ing sakubenge wiji. Safener ngidini panggunaan herbisida Dual Magnum minangka perawatan pra-tumuwuh.
Evaluasi resistensi bintik godhong target
SCP ditandur ing Stasiun Riset Tanaman Pusat ing Clayton, NC tanggal 14-15 Juni 2017 lan 20 Juni 2018 kanthi desain blok lengkap acak kanthi rong ulangan eksperimen ing saben kasus. Eksperimen ditandur ing baris tunggal 1,8 m kanthi jembar baris 0,9 m nggunakake 10 wiji saben plot. Rong baris wates ditandur ing sekitar pinggiran saben eksperimen kanggo nyegah efek pinggir. Eksperimen kasebut diinokulasi tanggal 20 Juli 2017 lan 20 Juli 2018 ing ngendi tanduran sorgum ana ing tahap pertumbuhan 3. Rating dijupuk ing skala siji nganti sangang, ing ngendi tanduran sing ora nuduhake tandha-tandha penyakit diwenehi skor sangang lan tanduran sing mati kabeh diwenehi skor siji. Rong rating dijupuk ing taun 2017 lan papat bacaan ing taun 2018 diwiwiti rong minggu sawise inokulasi saben taun. sAUDPC (area standar ing kurva perkembangan penyakit) diitung kaya sing diterangake sadurunge.
Wektu kiriman: 01-Apr-2021