Protein DELLA minangka induk sing dilestarikanpengatur pertumbuhansing nduweni peran penting kanggo ngontrol perkembangan tanduran minangka respon kanggo isyarat internal lan lingkungan. DELLA tumindak minangka regulator transkripsi lan direkrut kanggo nargetake promotor kanthi naleni faktor transkripsi (TF) lan histon H2A liwat domain GRAS. Panliten anyar nuduhake yen stabilitas DELLA diatur sacara pasca-translasi liwat rong mekanisme: poliubiquitinasi sing diinduksi dening fitohormon giberelin, sing nyebabake degradasi kanthi cepet, lan konjugasi pengubah kaya ubiquitin cilik (SUMO) kanggo nambah akumulasi. Kajaba iku, aktivitas DELLA diatur kanthi dinamis dening rong glikosilasi sing beda: interaksi DELLA-TF ditingkatake dening O-fucosylation nanging dihambat dening modifikasi N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) sing ana gandhengane karo O. Nanging, peran fosforilasi DELLA isih durung jelas, amarga panliten sadurunge nuduhake asil sing bertentangan, wiwit saka sing nuduhake yen fosforilasi ningkatake utawa nyuda degradasi DELLA nganti liyane sing nuduhake yen fosforilasi ora mengaruhi stabilitas. Ing kene, kita ngenali situs fosforilasi ing REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) dimurnèkaké saka Arabidopsis thaliana kanthi analisis spektrometri massa lan nuduhaké yèn fosforilasi rong peptida RGA ing wilayah PolyS lan PolyS/T ningkataké ikatan H2A lan ningkataké aktivitas RGA. Asosiasi RGA karo promotor target. Khususé, fosforilasi ora mengaruhi interaksi RGA-TF utawa stabilitas RGA. Panliten kita nuduhaké mekanisme molekuler sing digunakaké fosforilasi kanggo ngindhuksi aktivitas DELLA.
Kanggo njlentrehake peran fosforilasi ing ngatur fungsi DELLA, penting banget kanggo ngenali situs fosforilasi DELLA in vivo lan nindakake analisis fungsional ing tanduran. Kanthi pemurnian afinitas ekstrak tanduran sing diterusake karo analisis MS/MS, kita ngidentifikasi sawetara situs fosforilasi ing RGA. Ing kahanan kekurangan GA, fosforilasi RHA mundhak, nanging fosforilasi ora mengaruhi stabilitase. Sing penting, uji co-IP lan ChIP-qPCR nuduhake yen fosforilasi ing wilayah PolyS/T RGA ningkatake interaksi karo H2A lan hubungane karo promotor target, sing nuduhake mekanisme fosforilasi nyebabake fungsi RGA.
RGA direkrut kanggo target kromatin liwat interaksi subdomain LHR1 karo TF lan banjur kaiket karo H2A liwat wilayah PolyS/T lan subdomain PFYRE, mbentuk kompleks H2A-RGA-TF kanggo nyetabilake RGA. Fosforilasi Pep 2 ing wilayah PolyS/T antarane domain DELLA lan domain GRAS dening kinase sing ora dingerteni nambah ikatan RGA-H2A. Protein mutan rgam2A ngilangi fosforilasi RGA lan nggunakake konformasi protein sing beda kanggo ngganggu ikatan H2A. Iki nyebabake destabilisasi interaksi TF-rgam2A sementara lan disosiasi rgam2A saka kromatin target. Gambar iki mung nggambarake represi transkripsi sing dimediasi RGA. Pola sing padha bisa diterangake kanggo aktivasi transkripsi sing dimediasi RGA, kajaba kompleks H2A-RGA-TF bakal ningkatake transkripsi gen target lan defosforilasi rgam2A bakal nyuda transkripsi. Gambar diowahi saka Huang et al.21.
Kabeh data kuantitatif dianalisis sacara statistik nggunakake Excel, lan bedane sing signifikan ditemtokake nggunakake uji t Student. Ora ana metode statistik sing digunakake kanggo nemtokake ukuran sampel sadurunge. Ora ana data sing diilangi saka analisis; eksperimen kasebut ora diacak; para peneliti ora wuta babagan distribusi data sajrone eksperimen lan evaluasi asil. Ukuran sampel dituduhake ing legenda gambar lan file data sumber.
Kanggo informasi luwih lengkap babagan desain panliten, deleng Abstrak Laporan Portofolio Alami sing ana gandhengane karo artikel iki.
Data proteomik spektrometri massa wis disumbangake menyang konsorsium ProteomeXchange liwat repositori mitra PRIDE66 kanthi pengenal dataset PXD046004. Kabeh data liyane sing dipikolehi sajrone panliten iki diwenehake ing Informasi Tambahan, File Data Tambahan, lan File Data Mentah. Data sumber diwenehake kanggo artikel iki.
Wektu kiriman: 08-Nov-2024